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酵母菌的培养方法

放大字体  缩小字体 发布日期:2015-05-26  浏览次数:176
核心提示:酵母菌是一些单细胞真菌。酵母可以通过出芽进行无性生殖,也可以通过形成子囊孢子进行有性生殖。无性生殖即在环境条件适合时,从
  酵母菌是一些单细胞真菌。酵母可以通过出芽进行无性生殖,也可以通过形成子囊孢子进行有性生殖。无性生殖即在环境条件适合时,从母细胞上长出一个芽,逐渐长到成熟大小后与母体分离。在营养状况不好时,一些可进行有性生殖的酵母会形成孢子,在条件适合时再萌发。
   培养酵母最适pH 值为pH4.5-5.0。最适生长温度一般在28℃~30℃之间。
   酿酒酵母,用到的培养基有:
1、酵母完全培养基YPD:酵母提取物10g,蛋白陈20g,葡萄糖20g,定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。
2、SC(合成完全培养基)培养基(用于筛选酵母转化子):YNB(不含氨基酸的酵母氮源) 6.7g,葡萄糖20g,加入相应的氨基酸,定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。
    由于葡萄糖和氨基酸,灭菌是用115度,30min的灭菌条件。
    液体摇菌时一般在30度下摇24-30min,就可以,固体培养一般在30度下要3-5天。
   
    酵母破壁的液氮研磨方法的详细步骤:
    取1L酵母,诱导完后,离心(centrifugation)收菌体,称湿重,用蛋白(protein)纯化buffer悬浮菌体,重量(g):buffer体积(毫升)=1:1--1:2。用注射器将菌液加入液氮中,控制加入速度,使得菌液进入液氮中后形成小颗粒,太快容易结成块。将菌体液氮颗粒转入高速打碎器(用的是打碎草药的机器,RMB600)中,注意不要将多余液氮倒入,大约2-3万转/分破碎1分钟,菌体颗粒应该成粉末状。倒出粉末,37度水浴融化后,再用注射器加入液氮中,重复上述步骤,重复3次。高速(20000rpm,4度30分)离心(centrifugation)收上清,如上清杂质较多,需要多离几遍,上清中目标蛋白(protein)纯化同E.coli. 
 
 
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